• Introdução
  • Epidemiologia
    • Aquelas que acometem 1,3/2 mil indivíduos
      • 17 milhões de brasileiros estão afetados
      • 80% são doenças genéticas, mas também tem infecções mais raras e autoimunes, que também tem relação com a genética
    • Cerca de 7000 doenças diferentes
      • Hoje, cerca de metade já estão identificadas
    • Nem sempre a história clínica + exame físico são capazes de diagnosticar
  • Manejo
    • Diagnóstico
      • Tentar chegar a um diagnóstico preciso é muito importante
      • Clínico: pode ser inclusive exclusivamente clínico - neurofibromatose e acondroplasia
      • Laboratorial: na maioria dos casos, deve ter realização de exames
    • Prognóstico
      • A partir do diagnóstico é possível falar do prognóstico e fazer o aconselhamento dos riscos genéticos, tanto para a família que acabou de receber, como para gerações futuras
    • Risco genético é empírico da situação, enquanto o prognóstico depende da evolução do quadro do paciente
  • Classificação das doenças raras
    • Doenças cromossômicas: alterações em número ou estrutura;
    • Doenças monogênicas - grande maioria delas;
      • Até 2000: das 7000 doenças descritas, cerca de 100-200 com gene identificado
    • Doenças multifatoriais - sai um pouco do escopo das doenças raras;
      • Predisposição genética (vários genes afetados), mas com grande importância ambietal - DM; HAS; outras doenças crônicas...
    • Doenças epigenéticas: não há uma alteração direta na sequência do DNA, mas alterações nas expressões genéticas.
      • Tem um número menor

Diagnóstico de doença genética

• Sequenciamento genômico foi realizado no início dos anos 2000. Esse evento foi um divisor por diagnosticar as doenças como:
  • Pré-genoma x Pós-genoma: diferença no manejo dos quadros
  • Já se conhecia causas antes do sequenciamento completo, por sequenciamento e descrição de genes completos - cerca de 300 doenças tinham causas bem definidas
  • De qualquer forma, houve grande avanço após o grande avanço do sequenciamento gênico

Alterações cromossômicas (número e estrutura de cromossomos) → genética médica (malformações, deficiência intelectual, infertilidade) e hematologia.

• Cariótipo → avalia, ao microscópio, o número de cromossomos e a estrutura dos cromossomos (através do padrão de banda - mudança conformacional e de estrutura) do indivíduo.
  • No geral técnica grosseira que só observa erros grandes .
  • Análise é feita por indivíduos humanos: exame muito artesanal, mas feito em larga escala - depende de treinamento específico
    • Muitas técnicas são produzidas para diminuir a chance de erro e minimizar a necessidade de realização de cariótipo
    • Nesta imagem: trissomia do 18

• O sangue do paciente é coletado e colocado em cultura. São obtidas metáfises das culturas de células sanguíneas, que são bandeados para avaliação cromossômica.
  • Depende de condensação do cromossomo, mas em geral corresponde a uma banda
    • Nesse caso visualiza-se a deleção uma banda de 30Mb
• Em geral, são visualizadas alterações estruturais maiores que 5-10 Mb (visíveis ao cariótipo) → malformações congênitas múltiplas.

• • Alterações menores → FISH, microarrays.
• FISH (Hibridação in Situ Fluorescente) → uso de sondas de DNA para detecções no número de cópia dos cromossomos.
  • Por isso é importante já ter uma suspeita para escolher bem o segmento: utiliza sonda específica do cromossomo que se quer avaliar e utiliza na fase de metáfise (avaliação com cromossomos condensados) ou em intérfase (menos indicada - avaliação do número de sondas)
    • Marcação vermelha: de interesse (região do cromossomo que se quer avaliar)
    • Marcação verde: controle (centrômero do cromossomo de interesse)
  • OBS.: nesse caso - Sd de Williams, causada pela deleção do cromossomo 7 (gene da elastina)
  • FISH: muito usada para pesquisa de leucemias e identificação de translocações
    • FISH é um exame direcionado
    • Essas translocações, que não tem perda ou ganho de material genético, dependem do FISH para seu diagnóstico

• Microarrays/Hibridação genômica comparativa → uso de diversas sondas de DNA para detecção de cópias de segmentos de bases.
  • Ao invés de uma sonda, há milhares ou milhões de sondas - procedimento e ideia é semelhante ao FISH
  • Cada ponto corresponde a uma sonda, avaliando todos os cromossomos
  • Avalia, em plotagem de gráfico, intensidade de sondas (maior ou menor)
    • Menor indica que não houve hibridização em todos os cromossomos - grupo de sondas que não foi detectada: mostra com maior precisão as regiões deletadas
    • Verifica se cada uma das regiões está presente em x cópias
  • Na imagem, verifica-se a deleção de um único éxon que pode explicar o quadro clínico do paciente
    • Região MBD5 com a deleção próxima a um único éxon (representado por uma barrinha)
  • Principal método de rastreio para alterações cromossômicas: aqui não há necessidade de suspeita de região, apenas a suspeita de alteração cromossômica.
    • Não avalia translocações, apenas alterações numéricas

CROMOSSOMO vs ARRAY CGH

• Pedaço marcado em vermelho: cerca de 4 Mb (passível de ser identificada por ser humano)
• Ao lado, em rosa, se verifica a deleção de 1 Mb indicado pelo Array, indicado por uma centena de sondas, em região de 4 Mb - sabemos onde começa e onde termina a deleção

Primeiros Genomas